CASO CHOCOLATE: LUMINOL LA PRUEBA QUIMICA CLAVE PARA DETERMINAR SANGRE EN UNA ESCENA DEL CRIMEN.HASTA EL MOMENTO SE DESCONOCE EL RESULTADO.

Como bien sabemos que la investigación de manchas de sangre (hematología forense) sigue ocupando un lugar preferente en Criminalística, toda vez que, con frecuencia, las ropas manchadas de sangre durante un acto violento son lavadas para tratar de eliminar los vestigios. Por otro lado, el espectacular avance de la tecnología de investigación sobre el análisis del ADN mediante PCR ha dotado a la criminalística de la posibilidad de estudiar indicios mínimos que, con otros métodos, sería imposible analizar. Este tipo de muestra plantea una mayor dificultad en la detección de la mancha. En el presente artículo analizaremos la sensibilidad del luminol para encontrar manchas de sangre invisibles; asimismo sobre estas manchas que se intenta extraer y amplificar ADN   los resultados indican que el luminol es muy eficaz para detectar indicios invisibles. Además, es necesario señalar que no se produce interferencia del reactivo en la posterior extracción y amplificación del ADN 

Es el fenómeno por el cual una sustancia emite luz visible, al ser irradiada con luz, de menor longitud de onda que la absorbida.

Es el mismo fenómeno que la fluorescencia, pero la emisión de luz se produce lentamente.

Es una sustancia que al oxidarse en medio básico, emite luz. El oxidante puede ser H2O2, ClNa, perborato y otros.

Luminol es un producto químico que brilla intensamente con una luz azulada cuando entra en contacto con sangre. Incluso reacciona con los rastros de varios años de la sangre. Un producto químico ultra-sensible, puede detectar sangre en una porción por millón. En términos simples, esto significa que si hay incluso una gota de la sangre en 999.999 gotas del agua, brillará intensamente el luminol. El Luminol es un reactivo muy sensible que permite la búsqueda y localización de manchas de sangre. Debido al método de aplicación, es muy útil cuando se deben estudiar zonas amplias. Además, ya se comprobado que su aplicación sobre manchas de sangre (visibles), no impide el análisis de ADN  por PCR.

¿CÓMO LA AYUDA DE LUMINOL SOLUCIONA CRÍMENES?

Las víctimas de crímenes sangrientos, violentos no pueden desaparecer sin un rastro que es la asunción básica en la cual los investigadores de la escena de crimen funcionan. No importa cómo el asesino intenta difícilmente limpiar encima de la sangre y disponer del cuerpo, seguirá habiendo algunos rastros indicadores de la sangre. Las partículas minúsculas de la sangre pueden aferrarse en la mayoría de las superficies por años en extremo, sin siempre ser considerado.

El Luminol es eficaz en revelar estos rastros. Hay una reacción química entre varios productos químicos y la hemoglobina (una proteína en la sangre que lleva el oxígeno), de que produce la luz. Hay una interrupción de las moléculas, que entonces se cambian para formar diversas moléculas. En la reacción química del luminol, las moléculas originales (reactivo) tienen más energía que las moléculas nuevas (productos). La luz adicional es desechada por las moléculas bajo la forma de fotones ligeros. Este fenómeno se conoce como quimioluminescencia.

El luminol ayuda a proporcionar pistas en cuanto a cómo los acontecimientos pudieron haber revelado o la clase de arma haber utilizado. Por ejemplo, los patrones de la salpicadura de la sangre de un objeto embotado contra los de un cuchillo agudo serán diferentes. A veces, las impresiones sangrientas del zapato dan muchos de pistas sobre los movimientos del asaltador después del ataque. Luminol puede también conducir a investigadores a descubrir nueva evidencia. Por ejemplo, si hay una reacción positiva al luminol rociado en una alfombra, después quitar la manta puede revelar entarimados sangre-empapados.

La temperatura, el pH, el catalizador y la misma concentración del luminol influirán en que la luz que se obtenga sea más menos brillante y en la duración de la emisión. Aunque existen varios métodos para detectar las manchas de sangre, la aplicación del luminol es interesante porque es una prueba muy sensible, lo que permite utilizarla en la detección de manchas que han sido previamente lavadas. La reacción será catalizada por la hemoglobina que contiene la sangre.

Una aplicación de esta oxidación del luminol es utilizada por los especialistas para buscar pistas en casos de homicidios, para descubrir una eventual presencia de manchas de sangre humana en el escenario de un crimen, produciéndose luminiscencia al ser aplicado en los lugares donde hubo sangre, aún si esta ha sido lavada o si el lugar donde se encontraba se ha vuelto a pintar. La luminiscencia es producida por la aplicación de la luz ultravioleta sobre el área que se sospecha se encontraba cubierta de sangre.

Luminol se utiliza típicamente en una escena de crimen donde la matanza se sospecha para haber sucedido pero no hay rastros de la sangre visibles al ojo desnudo. Se obscurece el cuarto y entonces este producto químico se pulveriza o rocía sobre un área grande o zona sospechosa. Si se revelan rastros de sangre, aparecerá luminiscencia azul, entonces los investigadores aplican videocinta o fotografía en la escena de crimen.

El luminol es oxidado para formar un dianón, el cual posee enlaces de amida que dan el anión de ácido 3-aminoftálico en su triple estado excitado. Los electrones excitados pasan al estado de singular y por último al estado basal. En este punto es que se produce una luz verde-azul. El luminol emite luz a una longitud de onda de 485nm en un medio aprótico y a 425nm en un medio prótico.

Cuando una molécula absorbe luz ultravioleta o visible, se promueve un electrón de estado basal a un estado de excitado singular, lo que significa un estado en el cual los electrones están apareados. Inmediatamente después de la promoción electrónica (en un lapso de 10 a 11 segundos), el electrón desciende al estado de excitado singular de menor energía. Una de las formas en que una molécula excitada con sus electrones en este particular estado de menor energía, puede regresar al estado basal, es por pérdida de su energía en forma de luz. Este proceso también es rápido. La energía emitida en forma de luz es ligeramente menor que la inicialmente absorbida (la diferencia da lugar a un aumento en los movimientos moleculares) y por consiguiente, la longitud de onda emitida es algo mayor que la absorbida.

Se ha comprobado que la aplicación del luminol sobre manchas de sangre (visibles), no impide el análisis de ADN  por PCR. Debido a estas características, se puede pensar que el luminol sea el reactivo adecuado para la detección de indicios invisibles. Sobre los indicios que sean localizados se debe estudiar si es posible la extracción y el análisis del ADN  mediante PCR.

En recientes e interesantes trabajos se ha utilizado el luminol para individualizar la sangre y realizar sobre la muestra la determinación del ADN, lo que en muchos casos evita con mucha frecuencia que las personas implicadas en una acción criminal intenten hacer desaparecer cualquier indicio que pueda ser utilizado como prueba de su participación en dicho crimen. Afortunadamente, el análisis del ADN  mediante PCR ha proporcionado a la criminalística la posibilidad de estudiar indicios mínimos que de otra forma sería imposible de analizar. Estudios sobre el cual se han publicado muchos trabajos de investigación en los que se consigue extraer y analizar ADN  de manchas de sangre que se han intentado eliminar mediante lavado. Sin embargo, en este tipo de muestra se plantea la importante dificultad de la detección de la mancha. Por esta razón se hace imprescindible disponer de métodos de búsqueda cada vez más sensibles, capaces de detectar indicios no visibles. Además es necesario que estos métodos no tengan un efecto adverso sobre el posterior análisis del ADN 

Respecto a las pruebas de identificación de manchas de sangre, tradicionalmente, se ha venido realizando sistemas de investigación que incluyen la realización de los siguientes diagnósticos:

1.- Pruebas de Orientación. 

2.- Pruebas de Certeza. 

3.- Pruebas de Especie. 

4.- Prueba Individual (grupos, ADN, sexo). 

5.- Otros (antigüedad, lugar de procedencia, etc.).

Al respecto, debemos de enfatizar que, desde que se introdujo la investigación del ADN en Criminalística hasta el momento actual, la técnica ha ido precisando su sensibilidad; al respecto es necesario precisar que la prueba de quimioluminiscencia, tal como lo es el luminol, pertenezca a las pruebas de orientación, debido a que sólo proporcionan una orientación general de la naturaleza de la mancha. Es así que el uso del luminol al ser una actividad peroxidasa tiene desventajas distintas porque está presente en muchas sustancias tales como metales, jugos de fruta, detergentes, productos de limpieza en general (el blanqueo de la casa) y  la contaminación de la escena del crímen; por lo que, es posible también que estas sustancias hagan luminol y reacciones inespecíficas, obteniéndose falsos resultados tanto positivos como negativos, debido. Por lo tanto, un resplandor revela simplemente a los investigadores la posibilidad de sangre en el área. Un investigador experimentado, observando la velocidad de la reacción química puede juzgar si la sustancia era sangre o algo más. Pero para ser absolutamente seguras que era sangre, otras pruebas necesitan ser funcionadas.

 El uso de luminol como reactivo de búsqueda tanto en la escena del crimen como en el laboratorio puede resultar muy útil por su capacidad de localizar manchas no visibles y su no interferencia en el análisis de DNA. Al mismo tiempo hay la posibilidad de obtener ADN  de muestras mínimas tiene como consecuencia que los métodos de búsqueda de indicios adquieran especial relieve.